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γ干擾素釋放分析T-SPOT.TB診斷結核感染臨床應用
中RD1 包含9個開放讀碼框(Rv3871 ~Rv3879 c), 被證實在所有的卡介苗菌株中均不存在,因此最具有編碼特異性抗原的潛質。結核感染后體內長期存在抗原特異性的記憶性T 細胞, 當再次遇到抗原刺激時, 能迅速活化增殖, 釋放γ干擾素。綜合以上原理, 英國學者Lalvani 建立了以RD1 編碼的結核特異性抗原6 kD早期分泌靶向抗原(early secreting antigen target-6, ESAT-6) 和10 kD培養濾過蛋白(culture filtrate protein-10, CFP-10)肽段庫為刺激原, 檢測外周血中結核特異性釋放C干擾素的T淋巴細胞, 從而診斷結核感染的新方法。T-SPOT.TB2004年在歐洲、2005年在加拿大被批準使用, 美國FDA的審批在2008年完成。T-SPOT.TB是目前C干擾素釋放分析診斷結核感染的最主要方法之一。
T-SPOT.TB的實驗結果清晰, 易于判斷。實驗設有空白對照、陽性對照以及以ESAT-6 和CFP-10肽段庫作為刺激原的兩個實驗孔。空白對照孔內斑點數小于10且陽性對照孔內斑點數大于20時視為實驗有效。當空白對照孔內斑點數小于6時, 任一實驗孔斑點數減去空白對照后大于等于6, 結果判為陽性; 當空白對照孔內斑點數大于6時, 任一實驗孔斑點數大于空白對照的2倍, 結果判為陽性。T-SPOT.TB的實驗結果用每106PBMCs中斑點形成細胞(spot forming cells, SFC s)的數目來描述, 即SFCs/106PBMCs。
T-SPOT.TB的臨床意義
敏感性與特異性評價：潛伏性結核感染的診斷無金標準, T-SPOT.TB 敏感性評價多在培養或病理陽性的活動性結核患者中進行。Pai等對近3 年的13項研究進行Meta分析, 這些研究共納入726例受試者, 絕大多數是結核培養陽性、HIV 陰性的成年人, 分析表明T-SPOT.TB 的綜合敏感性為90%。在免疫力低下的人群中, T-SPOT.TB依然能夠維持較高的敏感性。Chapman等研究顯示39例HIV陽性的結核患者中T-SPOT.TB的敏感性為90%, 而PPD 皮試的陽性率僅為72%。Liebeschuetz等報道了對293例懷疑結核的非洲兒童的隨訪結果, 這些兒童的平均年齡為3 歲, 約46% HIV 陽性, 多數合并營養不良, 對于確診結核或高度懷疑結核的病例, T-SPOT.TB的陽性率為83%, PPD 皮試的陽性率為63%, 兩者差異具有顯著性(P<0.001)。數據分析顯示年齡、HIV 感染狀態和營養不良的嚴重程度對T-SPOT-TB結果無影響, 但均能導致PPD 皮試結果的顯著差異。提示T-SPOT.TB 在免疫力低下的個體中具有更高的診斷效能。Nicol等在2009年發表了對243 例可疑結核的嬰幼兒的研究結果,這些嬰幼兒平均年齡為18個月, 在經痰或胃灌洗液結核菌培養陽性確診的病例中, T-SPOT.TB 的陽性率僅為50%, 而年齡大于12個月的幼兒與12個月之內的嬰兒相比, 前者陽性率明顯增高, 提示在嬰兒中診斷結核感染會降低T-SPOT.TB的敏感性。在肺外結核的診斷中, T-SPOT.TB 具有較高的敏感性。Ferrara等和Lee等報道的兩個前瞻性研究中, 共包括18例肺外結核患者, T-SPOT.TB 的陽性率為100% 。Kmi 等隨診72例懷疑肺外結核患者的前瞻性研究顯示, 對于活動性肺外結核, T-SPOT.T和PPD的敏感性分別為94%和47%, 二者比較差異具有顯著性(P<0.001)。47% 的隨診對象合并有導致免疫低下的情況, 包括HIV 感染、腫瘤、移植、糖尿病以及自身免疫病等, 可能是導致PPD皮試的陽性率顯著降低的原因。T-SPOT.TB特異性評價的研究都在結核低流行區進行。Pai等的Meta分析中納入了6項研究,其中5項中的受試者都常規地接受BCG免疫。6項研究共包括290名受試者, 93% 為無結核接觸史的健康成年人, 其綜合特異性為93%。
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